La Barbie y sus compañeras residen en Barbieland, una sociedad matriarcal poblada por diferentes versiones de Barbies, Kens y un grupo de modelos descatalogadas, que son tratadas como raras debido a sus rasgos poco convencionales. Mientras los Kens se pasan el día jugando en la playa, considerándola su profesión, las Barbies desempeñan trabajos de prestigio como médico, abogado y político. Beach Ken («Ken») sólo es feliz cuando está con Barbie y busca una relación más estrecha, pero ella le rechaza en favor de otras actividades y amistades femeninas.
Una noche, en una fiesta de baile, Barbie se siente repentinamente preocupada por la muerte. De la noche a la mañana, desarrolla mal aliento, celulitis y pies planos, lo que altera sus rutinas habituales al día siguiente. La Barbie rara, marginada debido a su desfiguración, le dice que debe encontrar al niño que juega con ella en el mundo real para curar sus aflicciones. Ken viaja de polizón en su convertible para acompañarla, a lo que Barbie accede a regañadientes.
Al llegar a Venice Beach, Barbie golpea a un hombre por manosearla, lo que provoca su breve detención y la de Ken. Alarmado por su presencia, el director ejecutivo de Mattel ordena su recaptura. Barbie localiza a su dueña, una adolescente llamada Sasha, que la critica por fomentar unos cánones de belleza poco realistas. Desconsolada, Barbie descubre que Gloria, empleada de Mattel y madre de Sasha, catalizó sin querer su crisis existencial después de que Gloria empezara a jugar con los viejos juguetes de Barbie de Sasha en un estado similar. Mattel intenta meter a Barbie en una caja de juguetes para volver a fabricarla, pero ella escapa con la ayuda de Gloria y Sasha y las tres viajan a Barbieland con los ejecutivos de Mattel en su persecución.
Mientras tanto, Ken aprende sobre el sistema patriarcal y se siente respetado por primera vez. De vuelta a Barbieland, convence a los otros Kens para que tomen el mando, y las Barbies son adoctrinadas en papeles sumisos, como novias agradables, amas de casa y criadas. Ella llega e intenta sin éxito convencer a Ken y a las demás Barbies de que vuelvan a ser como antes. Se deprime, pero Gloria pronuncia un discurso inspirador sobre las expectativas contradictorias que la sociedad tiene de las mujeres, lo que devuelve a sí misma la confianza.
Con la ayuda de Sasha, Barbie la Rara, Allan y las muñecas descatalogadas, los discursos de Gloria desprograman a las Barbies de su adoctrinamiento. Las Barbies manipulan a los Kens para que se peleen entre ellos, distrayéndolos de la consagración de la superioridad masculina en la constitución de Barbieland, y las Barbies recuperan el poder. Tras haber experimentado en carne propia la opresión sistémica, las Barbies deciden rectificar los defectos de su sociedad anterior, haciendo hincapié en un mejor trato a los Kens y a todos los marginados.
Barbie y Ken se disculpan mutuamente, reconociendo sus errores. Ken se lamenta de no tener sentido sin Barbie, por lo que Barbie le anima a encontrar una identidad autónoma. Barbie, que sigue sin estar segura de su propia identidad, se encuentra con el espíritu de Ruth Handler, cofundadora de Mattel y creadora de la muñeca Barbie, quien le explica que la historia de Barbie no tiene un final fijo y que su historia, en constante evolución, supera sus raíces.
Ella decide convertirse en humana y volver al mundo real, y es despedida por las Barbies, los Kens y los ejecutivos de Mattel. Algún tiempo después, Gloria, su marido y Sasha llevan a ella, que ahora se llama «Barbara Handler», a su primera cita con el ginecólogo.
Ahora vive en Barbieland donde todo es ideal y lleno de música y color. Un buen día decide conocer el mundo real. Cuando el CEO de Mattel se entere, tratará de evitarlo a toda costa y devolver a Barbie a una caja.